樣本因素對(duì)ELISA技術(shù)的質(zhì)量影響
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。其中外源性干擾因素是我們?cè)跈z測(cè)過程中可以避免也是必須避免的因素，而避免內(nèi)源性因素的干擾則主要通過選擇合適的試劑盒。在臨床中遇到少見的疑難病例時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮到內(nèi)源性干擾因素的存在。以下對(duì)外源性干擾因素進(jìn)行簡(jiǎn)要說明：
1.標(biāo)本溶血 要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其具有類過氧化物的活性，因此，在以辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中，如果血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，ELISA試劑盒從而與后面加入的底物反應(yīng)顯色。
2.標(biāo)本凝固不全 血液通常在采集后半小時(shí)后開始凝固，18～24h*凝固。如果在血液未凝固時(shí)即離心分離血清，則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結(jié)果。為了縮短標(biāo)本處理時(shí)間，可以在離心前將血液標(biāo)本置于溫箱中溫育或者采用帶分離膠的或于中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽┮约铀傺宓姆蛛x。
3.標(biāo)本被細(xì)菌污染 標(biāo)本的采集及血清分離要注意盡量避免細(xì)菌污染。細(xì)菌菌體中除可能含有內(nèi)源酶對(duì)測(cè)定產(chǎn)生非特異性干擾外，還可能對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用。另外標(biāo)本在保存中出現(xiàn)渾濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
4.標(biāo)本貯存時(shí)間過長 標(biāo)本在低溫下保存時(shí)間過長，ELISA試劑盒IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底加深、甚至出現(xiàn)假陽性結(jié)果。通常情況下血清標(biāo)本可在2～8℃下保存l周，冷凍保存時(shí)間會(huì)更長，但對(duì)于抗體或抗原含量低的標(biāo)本而言，則可能會(huì)因抗體掉價(jià)、抗原分解而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
5.冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融ELISA試劑盒 標(biāo)本的反復(fù)凍融會(huì)因其所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，使抗體效價(jià)跌落從而引起假陰性結(jié)果，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝凍存。此外，標(biāo)本在凍存時(shí)會(huì)因蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，因此重新融解的標(biāo)本必須混勻，但不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒即可。
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