公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-2H3 | 貼壁生長 | EY-X63595 |
細胞名稱 大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-2H3
形態(tài)特性: 成纖維細胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性: RBL-2H3是1978年國立牙科研究所的免疫學實驗室從Wistar大鼠保持腫瘤狀態(tài)的嗜堿性細胞中分離和出來的嗜堿性白血病細胞株。這些細胞具有高親和力的IgE受體。通過集聚這些受體或與鈣離子載體協同作用可以激活它們分泌組胺及其他遞質。這株細胞廣泛地用于研究肥大細胞FcERI和分泌的生化途徑。RBL-2H3細胞是研究FcERI結構的模型。它們廣泛地用于研究細胞分泌的不同方面,包括細胞內鈣濃度改變、磷酸脂酶激活、蛋白激酶和小G蛋白的作用。雖然幾乎所有批號的FBS都支持細胞的生長,但在某些批號中FcERI集
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質熱滅活胎牛血清,15%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況: PN5
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
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冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的小鼠小膠質細胞;BV2-tdT DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Kocuria kristinae (Kloos et al.) Stackebran ..細胞名稱: 紅色熒光蛋白和螢光素酶標記的人肺癌細胞;A549-Luc2-tdT-2 McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的人胃癌細胞;MGC803-tdT DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Homo sapiens, human細胞名稱: 綠色熒光蛋白標記的人肺癌細胞;A549-EGFP McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
Xenorhabdus poinarii (Akhurst) Akhurst and ..細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的人胃癌細胞;MGC803-mCherry DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
Salmonella enterica subsp.enterica (e ..細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的人鼻咽癌細胞;E2Z-tdT RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Homo sapiens, human細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的人鼻咽癌細胞;E2Z-mCherry RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
frozen細胞名稱: 綠色熒光蛋白標記的人鼻咽癌細胞;E2Z-EGFP RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 紅色熒光蛋白和螢光素酶標記的人鼻咽癌細胞;E2Z-Luc2-tdT RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的人骨肉瘤細胞;HOS-mCherry MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS;1%NEAA
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的人骨肉瘤細胞;HOS-tdT MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS;1%NEAA
Staphylococcus xylosus Schleifer and Kloos細胞名稱: 紅色熒光蛋白和螢光素酶標記的人骨肉瘤細胞;HOS-Luc2-tdT MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS;1%NEAA
freeze-dried細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的人非小細胞肺癌細胞;NCI-H1299-tdT RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Blastocystis hominis Brumpt細胞名稱: 紅色熒光蛋白標記的人非小細胞肺癌細胞;NCI-H1299-mCherry RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Streptococcus pyogenes Rosenbach細胞名稱: 綠色熒光蛋白標記的人非小細胞肺癌細胞;NCI-H1299-EGFP RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Phellinus igniarius (Fries) Quelet細胞名稱: 紅色熒光蛋白和螢光素酶標記的人非小細胞肺癌細胞;NCI-H1299-Luc2-tdT-2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-2H3人凋亡誘導因子(AIF)ELISA試劑盒TrxRELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人肥大細胞類(MCT)ELISA試劑盒TrxRELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人白細胞分化抗原14(CDl4)ELISA試劑盒TrxRELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人干擾素誘導T細胞趨化因子(ITAC/CXCL11)ELISA試劑盒Try-ⅡELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人γ干擾素誘導單核細胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA試劑盒trypsinELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人肌細胞生成素(MYOG)ELISA試劑盒TSELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人激動異構酶/細胞分裂素MB(CKMB)ELISA試劑盒TSGFELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
人集落刺激因子(CSF)ELISA試劑盒TSGFELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。